Протеиназа K, субтилизиноподобная сериновая протеаза, обладает широкой субстратной специфичностью и преимущественно расщепляет эфирные и пептидные связи на С-конце гидрофобных, серосодержащих и ароматических аминокислот.

Протеиназа К - эндопротеаза широкого спектра действия., расщепляющая белки даже в присутствии детергентов. Относится к классу сериновых протеаз. Протеиназа К гидролизует пептидные связи со стороны карбоксильной группы алифатических, ароматических и гидрофобных аминокислот. Минимальный размер расщепляемого пептида - 4 аминокислоты.

Протеиназа К Thermo Scientific - готовый к использованию раствор с концентрацией не менее 600 ед/мл (20 мг/мл).

Области применения:

• Выделение нуклеиновых кислот из животных тканей и клеточных культур;
• удаление ДНКаз и РНКаз в процессе выделения и очистки нуклеиновых кислот;
• определение локализации ферментов.

Рекомендуемая рабочая концентрация фермента - от 0.05 до 1 мг/мл. Активность фермента повышается в присутствии 0.2-1% SDS или 1-4 М мочевины.

Ионы кальция являются фактором регуляции связывания протеиназы К с субстратом и повышают стабильность фермента. Оптимальное значение рН - от 7.5 до 8, но белок стабилен при рН от 4 до 12. Оптимальная температура - +50-55^оС, при нагревании свыше +65^оС протеиназа К инактивируется.

Протеиназа К представляет собой протеазу широкого спектра действия. Протеиназа К широко используется, обычно используется в молекулярной биологии, клеточной биологии, иммуногистохимии и других экспериментах.

Характеристики протеиназы К

• Не содержит ДНКазы, РНКазы;
• молекулярная масса, кДА – около 30;
• чистота – > 95% (по SDS-PAGE);
• удельная активность, ЕД/мг – >30.

Alprep Forensic Plus — набор реагентов для выделения ДНК из биологических тканей и выделений, исследуемых в ходе молекулярно-генетической экспертизы по идентификации человека и установлению родства. Набор позволяет получить высокоочищенную ДНК для дальнейшего анализа методами ПЦР и капиллярного электрофореза. Выделение и очистка проводятся с помощью термического лизиса и связывания ДНК с магнитными частицами, отмывки примесей и элюирования в низкосолевом буфере.

Набор Alprep Forensic Plus содержит в себе все компоненты набора Alprep Forensic и дополнительно 1,5 мл готового раствора протеиназы К (концентрация 20 мг/мл).

Образцы, для работы с которыми предназначен набор:

• мягкие ткани;
• ногтевой материал (ногтевые пластины и подногтевое содержимое);
• волосы (с целыми влагалищными оболочками);
• кровь (цельная, плазма, сыворотка, сухие пятна);
• сперма (в том числе после дифференциального лизиса);
• эпителий (буккальный, кожный);
• биологические жидкости (слюнные выделения, мокрота, моча, ликвор, бронхоальвеолярный лаваж);
• следы биоматериала, собранные на носителях (зондах, FTA-картах и др.);
• адгезивные материалы (скотч, почтовые марки, клапаны конвертов, окурки сигарет, жевательная резинка, ткани, почва);
• кости и зубы (совместно с лизирующим буфером Alprep Bta).

Условия хранения и транспортировки:

• хранение 1 части (буферы и магнитные частицы) набора реагентов осуществляется при температуре от +4 до +25 °C в защищенном от света месте; 2 части (протеиназа К) — при температуре -20 °C;
• транспортировка 1 части (буферы и магнитные частицы) набора реагентов осуществляется при температуре от +4 до +25 °C в защищенном от света месте; 2 части (протеиназа К) — при температуре от +4 до +8 °C в защищенном от света месте;
• гарантийный срок годности набора — 24 месяца с даты производства при соблюдении условий хранения.

Набор One Step Mouse Genotyping предназначен для быстрого генотипирования мышей, содержит все необходимые реагенты для выделения ДНК и постановки ПЦР. Набор можно использовать для быстрого выделения геномной ДНК из тканей мышей. Мышиную ткань помещают в лизирующий буфер с протеиназой К, инкубируют при 55 °С в течение 20 мин, затем нагревают до 95 °С в течение 5 мин для инактивации протеиназы К. Полученный лизат после центрифугирования можно использовать в качестве матрицы для проведения ПЦР без дополнительной очистки ДНК.

В составе набора имеется 2×Taq Plus Master Mix (Dye Plus), который содержит высокоэффективную ДНК-полимеразу Taq Plus и смесь dNTP, для постановки ПЦР необходимо только добавить праймеры и матрицу (лизат) в реакционную смесь. Таким образом, при работе с набором сокращается количество открывания/закрывания пробирок и пипетирования, что значительно снижает вероятность перекрестного загрязнения образцов, повышает производительность и воспроизводимость результатов. Мастермикс сохраняет стабильность после многократного замораживания и оттаивания. Также Мастермикс содержит в своем составе краситель для нанесения на гель, поэтому электрофорез можно проводить сразу после завершения ПЦР.

Преимущества набора One Step Mouse Genotyping

• Содержит специально разработанный буфер для лизиса на основе протеиназы К;
• лизат используется в качестве матрицы для ПЦР без необходимости выделения ДНК;
• лизат пригоден для амплификации фрагментов ДНК длиной до 2 т.п.н., а также для мультиплексных реакций с использованием до четырех пар праймеров.

Условия хранения: буфер для лизиса тканей мыши при 2~8 °С; остальные компоненты при -20 °С.

Набор для высокоэффективного и быстрого выделения и очистки геномной ДНК из цельной крови и буккального эпителия. Совместим с автоматизированными станциями выделения ДНК, а также используется для выделения ДНК вручную, с применением магнитного штатива. Очищенная ДНК не содержит ингибиторов и может быть использована для проведения ПЦР, обработки эндонуклеазами рестрикции, Саузерн-блоттинга, подготовки образцов для секвенирования по методу Сэнгера, NGS-секвенирования и др.

Основные характеристики набора:

• сорбция ДНК на магнитных частицах;
• исходный материал – цельная кровь, буккальный эпителий;
• совместим с автоматизированными станциями для выделения нуклеиновых кислот (информация о совместимости со станциями выделения нуклеиновых кислот указана в инструкции к набору).

Состав набора:

• магнитные частицы (100 мг/мл);
• протеиназа К (лиофилизированная);
• буфер для растворения протеиназы К;
• лизирующий раствор ВВ;
• раствор для отмывки MAG A;
• раствор для отмывки В;
• буфер для элюции.

Краткое описание протокола выделения ДНК:
Выделение геномной ДНК проходит в два этапа. На первом этапе в образец добавляют смесь магнитных частиц и протеиназы К, затем добавляют лизирующий раствор. На втором этапе проводится отмывка ДНК, сорбированной на магнитных частицах, и последующая её элюция.

Условия и срок хранения: при комнатной температуре, 12 месяцев.

Рекомендуемые компоненты, не включенные в состав набора: автоматизированные станции выделения нуклеиновых кислот с соответствующим дополнительным пластиком или магнитный штатив; пробирки типа эппендорф объемом 1,5 мл при использовании магнитного штатива (2 пробирки для выделения ДНК из 1 образца); 96 % этанол (200 мл для набора на 100 образцов, 20 мл для набора на 10 образцов); натрий-фосфатный буфер (PBS) для выделения ДНК из буккального эпителия; шейкер для планшетов.

Alprep Forensic Auto — набор реагентов для выделения ДНК из биологических тканей и выделений, исследуемых в ходе молекулярно-генетической экспертизы по идентификации человека и установлению родства, при помощи автоматической станции для выделения ДНК AutoMate Express (Applied Biosystems). Набор позволяет получить высокоочищенную ДНК для дальнейшего анализа с помощью ПЦР и капиллярного электрофореза. Выделение и очистка проводятся с помощью термического лизиса и связывания ДНК с магнитными частицами, отмывки примесей и элюирования в низкосолевом буфере.

Набор содержит в себе герметично запаянные картриджи с буферными растворами и магнитными частицами, пробирки, наконечники, фильтр-колонки, а также лизирующий буфер и готовый раствор протеиназы К (в концентрации 20 мг/мл).

Количество реагентов и расходных материалов рассчитано на проведение экстракции из 52 проб.

Образцы, для работы с которыми может использоваться набор:

• кровяные пятна (сухие или влажные);
• эпителий (буккальный, контактные следы (кожный));
• волосы с целыми влагалищными оболочками;
• ногти и содержимое под ногтями;
• сперма;
• мягкие ткани;
• материал адгезивного типа (скотч, почтовые марки, клеящиеся стороны конвертов, окурки сигарет, жевательные резинки);
• FFPE-препараты;
• кости и зубы (совместно с лизирующим буфером Alprep Bta).

Условия хранения и транспортировки:

• 1 часть набора реагентов (картриджи, буфер, пластик): хранение при температуре от +18 до +25 °C без доступа прямых солнечных лучей; транспортировка осуществляется при температуре от +4 до +25 °C без доступа прямых солнечных лучей;
• 2 часть (протеиназа К): хранение при температуре -20 °C; транспортировка при температуре от +4 до +8 °C без доступа прямых солнечных лучей;
• гарантийный срок годности набора — 24 месяца с даты производства при соблюдении условий хранения.

Универсальный набор Platinum Direct PCR Universal Master Mix для прямой ПЦР предназначен для амплификации ДНК непосредственно из образцов различного происхождения без необходимости предварительного выделения ДНК. Содержит высокоэффективную Platinum II Taq ДНК-полимеразу с горячим стартом и нуклеозидтрифосфаты в инновационном буфере, который обеспечивает универсальный отжиг праймеров для высокой производительности в приложениях прямой ПЦР. Протокол быстрого лизиса обеспечивает эффективную амплификацию матрицы размером до 8 тыс. п. н. и совместное амплифицирование фрагментов различной длины. Образцы в буфере для лизиса могут храниться для последующего использования. Поставляется в комплекте с Platinum GC Enhancer для амплификации GC богатых регионов ДНК. Набор содержит краситель для прямого нанесения ПЦР-продуктов на агарозный гель.

Преимущества набора Platinum Direct PCR Universal Master Mix:

• прямая амплификация ДНК из различных образцов благодаря устойчивой к ингибиторам Platinum II Taq ДНК-полимеразе с горячим стартом;
• универсальная температура отжига праймера благодаря инновационному буферу, который обеспечивает отжиг всех праймеров при 60 °C;
• мультиплексирование до 5 мишеней;
• превосходная специфичность, чувствительность и производительность.

Характеристики набора Platinum Direct PCR Universal Master Mix:

• полимераза с горячим стартом;
• амплификация GC-богатых участков;
• быстрая амплификация;
• синтезирует ПЦР-продукт с 3’A-концами;
• максимальный размер конечного продукта — 8 тыс. п. н.

Состав набора Platinum Direct PCR Universal Master Mix:

• мастер-микс 2x Platinum Direct PCR Universal — 1 мл;
• лизирующий буфер — 5 мл;
• протеиназа К — 150 мкл;
• добавка Platinum GC Enhancer — 1,25 мл;
• вода без нуклеаз — 1,25 мл.

Условия хранения и перевозки: -20 °C.

Набор предназначен для выделения геномной ДНК из тканей, фиксированных в формалине и парафинированных (FFPE), преодолевая ингибирующий эффект, вызванный сшиванием формалина. Раствор для депарафинизации в этом наборе более безопасен, чем ксилол. Спин — колонка и уникальная буферная система, входящая в состав данного набора обеспечивают высокое качество получаемой ДНК. Весь процесс выделения занимает всего 20 минут (время ферментации не учитывается). Выделенная геномная ДНК целостная, высокой чистоты и стабильная, может быть использована для широкого спектра последующих экспериментов, включая ПЦР-анализ, количественная ПЦР и подготовку библиотек.

Преимущества набора

• Депарафинизация с помощью нетоксичного депарафинизирующего раствора;
• обработка нескольких образцов без ночной инкубации.

• порошок протеиназы К: хранить при температуре от 2 до 8 °C;
• раствор Протеиназы К хранить при -30 до -15 °C.

Остальные компоненты следует хранить от 15 до 25 °C и транспортировать при комнатной температуре.

Набор предназначен для выделения геномной ДНК из сперматозоидов. Очистка ДНК происходит за счёт её связывания с сорбентом колонок diaGene. Связанная ДНК отмывается от примесей и элюируется в виде чистого препарата, пригодного для большинства молекулярно-биологических манипуляций, например, ПЦР. Все реагенты, кроме раствора Протеиназы К, могут храниться при комнатной температуре. Раствор Протеиназы К необходимо хранить при -20 °С.

Преимущества набора Blood Direct PCR

• Содержит специально разработанные буферы для лизиса на основе протеиназы К;
• лизат используется в качестве матрицы для ПЦР без необходимости выделения ДНК;
• лизат пригоден для амплификации фрагментов ДНК длиной до 5 т.п.н., а также для мультиплексных реакций с использованием до четырех пар праймеров.

Условия хранения: -20 °С.

Набор предназначен для проведения прямой ПЦР Plant Direct PCR непосредственно из листьев растений, семян и других растительных тканей, без предварительного выделения ДНК. Также он может использоваться для высокопроизводительного скрининга растительных образцов, не содержащих полисахариды и полифенолы. В наборе применяется специально разработанная ДНК-полимераза, сохраняющая высокую устойчивость к растительным ингибиторам ПЦР, способная синтезировать фрагменты ДНК длиной до 5 т.п.н. Входящий в состав набора буфер А эффективно лизирует свежие и замороженные растительные ткани. Полученный лизат пригоден для использования в качестве матрицы в ПЦР без предварительной очистки ДНК. Благодаря специально подобранному составу лизирующего буфера, лизат можно использовать длительное время, даже при многочисленных циклах замораживания и оттаивания.

Для проведения амплификации нужно просто добавить праймеры и матрицу в оптимизированный мастер-микс Plant Direct.

Преимущества набора Plant Direct PCR

• Cодержит специально разработанные буферы для лизиса на основе протеиназы К;
• лизат используется в качестве матрицы для ПЦР без необходимости выделения ДНК;
• лизат пригоден для амплификации фрагментов ДНК длиной до 5 т.п.н., а также для мультиплексных реакций с использованием до четырех пар праймеров.

Условия хранения: мастер-микс Plant Direct храниться при -20 °С, избегая циклов замораживания и оттаивания; буферы для лизиса могут храниться как при -20 °С, так и при 2-8 °С.

QIAamp DNA Investigator Kit
Выделение и очистка общей ДНК (геномной, митохондриальной) из поверхностных или букальных соскобов, FTA-карт, тельных жидкостей, жевательной резинки, сигаретных фильтров, ногтей, волос, бумаги и других схожих материалов, малых количеств крови и слюны, тканей, костей, зубов; основано на процедуре лизиса клеточных стенок с последующим связыванием ДНК с мембраной (силикой) в миницентрифужной колонке при соответствующей ионной силе и рН; набор содержит протеиназу К; для ПЦР, саузерн-блоттинга и др.

Набор предназначен для выделения геномной ДНК из 200 мкл свежей или замороженной антикоагулированной цельной крови, 25 мг тканей животных, 5×10⁶ культивируемых клеток и 3×10⁹ культивируемых бактериальных образцов. Набор основан на технологии колоночной очистки на силикагеле. Не требует использования органических растворителей фенола/хлороформа или трудоемкого этапа осаждения спиртом. С помощью этого набора максимально удаляются остатки РНК, белков, липидов и других ингибирующих примесей. Полученная ДНК может быть непосредственно использована в ПЦР-анализе, количественной ПЦР, рестрикции и обнаружении вирусов.

Преимущества набора

• Высокая чистота полученной геномной ДНК;
• подходит для прямого выделения ДНК из свежих или замороженных антикоагулированных образцов крови, клеток, тканей животных и бактерий;
• время экстракции ДНК из тканей животных всего за 30 минут.

Условия хранения/транспортировки: от 15 до 25 °C / при комнатной температуре.

Если температура окружающей среды превышает 25 °C, рекомендуется хранить Протеиназу К при от 2 до 8 °C.

Набор реагентов для лизиса клеток. Полученные с помощью набора клеточные лизаты используются для постановки реакции ОТ-ПЦР без дополнительной очистки РНК. Доля лизата в реакционной смеси при постановке обратной транскрипции может составлять до 45%, при постановке количественной ПЦР – до 20%. Количество клеток в одной реакции лизиса – от 10 до 10⁵, время лизиса – 20 минут. В состав набора входят лизирующий буфер и растворы протеиназы К и ДНКазы.