ПЦР: наборы, миксы

• Двойной механизм «горячего» старта ДНК-полимеразы обеспечивает специфическую активность фермента и предотвращает синтез побочных продуктов до начала амплификации;
• в состав смеси входят урацил-ДНК-гликозилаза и дУТФ, что предотвращает риск контаминации ПЦР-продуктами других реакций;
• готовые ПЦР-смеси сохраняют стабильность до постановки ПЦР в течение 72 часов;
• мастер-микс может использоваться как для ПЦР в обычном режиме, так и для быстрой ПЦР.

• Thermo Fisher Scientific: StepOne, StepOne Plus, 7500 и 7500 Fast, ViiA 7, линейка QuantStudio;
• Bio-Rad: IQ 5, CFX96/384;
• Roche: LightCycler 480.

Мастер-микс Gloria Nova HS — это готовая к использованию 2-кратная смесь, содержащая все компоненты необходимые для проведения высокоточной ПЦР, кроме праймеров, зондов и матрицы. Мастер-микс содержит Gloria Nova HS ДНК-полимеразу с горячим стартом, являющуюся генно-модифицированным ферментом и обладающей 3’ ⇒ 5' экзонуклеазной (корректирующей) активностью, что обеспечивает высокую точность и превосходную процессивностью ПЦР. Мастер-микс Gloria Nova HS подходит для амплификации разных образцов ДНК, включая животных, растения, к ДНК и т.д.

Преимущества мастер-микса Gloria Nova HS

• ДНК-полимераза Gloria Nova HS входящая в состав мастер-микса обладает высокой точностью и процессивностью;
• опосредованный антителами «горячий старт» ингибирует неспецифическую амплификацию при комнатной температуре;
• применим как для стандартных ДНК-матриц, так и для GC-богатых матриц;
• устойчивость к ингибиторам ПЦР, например, таким как гуминовая кислота, этанол, и обладает хорошими характеристиками амплификации в сырых экстрактах.

Условия хранения: -20 °С.

Супермикс iQ Multiplex Powermix для мультиплексной ПЦР для реал-тайм ПЦР 5 мишеней в одной пробирке; не требует оптимизации реакционной смеси; детекция 4 мишеней, отличающихся по концентрациям; идеален для анализа экспрессии генов, SNP-генотипирования, исследования ГМО, исследования вирусной нагрузки.

Все необходимые компоненты реакции в одной пробирке в виде удобного 2-х раствора; необходимо внести только образец, зонд и праймеры; подготовка реакции при комнатной температуре; минимальный риск контаминации.

В смесь внесён калибратор фактора лунок; идеален для реал-тайм iCycler iQ, MyiQ и iQ5; готовая смесь, необходимо внести только образец и праймеры; подготовка реакции при комнатной температуре.

Мастер-микс PowerTrack SYBR Green это готовая оптимизированная, универсальная, 2-кратная смесь для проведения ПЦР в режиме реального времени. Мастер-микс содержит визуальный индикатор на основе синего красителя, который позволяет пользователю подтвердить, что образец был добавлен в реакционную смесь, тем самым минимизируя ошибки пипетирования. Опционно желтый буфер может быть добавлен к матрице (кДНК/ДНК), и при смешивании мастер-микса содержащего синий краситель и матрицы, предварительно смешанной с желтым буфером, реакционная смесь меняет цвет на зеленый, тем самым показывая, что матрица была добавлена в ПЦР-смесь.

Мастер-микс содержит все реакционные компоненты, включая оптимизированный реакционный буфер, смесь dNTP, в состав которой входит dUTP/dTTP, ДНК-полимеразу с «горячим стартом», термолабильную урацил-ДНК гликозилазу (UDG), ROX-краситель (пассивный эталонный краситель), инертный синий краситель и интеркалирующий краситель SYBR Green для детекции ПЦР-продуктов.

PowerTrack SYBR Green оптимизирован таким образом, что температура плавления праймеров может составлять от 55 до 65 °C.

Преимущества мастер-микса PowerTrack SYBR Green:

• визуальный индикатор на основе красителя для уменьшения ошибок пипетирования;
• широкий диапазон температуры плавления праймеров обеспечивают гибкость и минимальную оптимизацию реакции;
• превосходная специфичность и воспроизводимость;
• универсальная совместимость с амплификаторами;
• содержит инертный эталонный краситель ROX для нормализации флуоресценции во всех образцах;
• содержит UNG и dUTP для деградации любых ранее амплифицированных продуктов ПЦР и предотвращения загрязнение последующих реакций ПЦР;
• универсальная совместимость с наборами и мастер-миксами для обратной транскрипции;
• совместимость с мастер-миксом для SuperScript IV VILO для быстрых, воспроизводимых результатов обратной транскрипции.

Мастер-микс для ПЦР Phusion – это 2-кратная готовая реакционная смесь для ПЦР, содержащая ДНК-полимеразу Phusion, дезоксинуклеотидтрифосфаты (400 мкМ каждого) и оптимизированный буфер GC с MgCl₂ (1,5 мМ в конечной концентрации). Это удобный формат для постановки ПЦР, позволяющий экономить время и снизить число пипетирований, уменьшая тем самым риск ошибки.

Мастер-микс Phusion существует в 2 вариантах – с буфером HF и с буфером GC. Так как в буфере GC имеются компоненты, снижающие точность полимеразы Phusion примерно в 2 раза, его рекомендуется использовать только в случае амплификации сложных (GC-богатых) структур или длинных последовательностей. Для ПЦР с максимальной точностью рекомендуется использовать мастер-микс с буфером HF.

ДНК-полимераза Phusion синтезирует ПЦР-продукты с тупыми концами.

Кроме самого мастер-микса, в состав комплекта входит пробирка с ДМСО.

• высокая точность синтеза (в 52 раза выше по сравнению с Taq);
• более высокая скорость синтеза – 1 тыс. п.н. за 15-30 секунд;
• универсальность – практически не требуется оптимизация условий ПЦР;
• больший выход ПЦР-продукта при минимальном количестве фермента.

• высокоточная ПЦР;
• клонирование;
• синтез ДНК для секвенирования;
• амплификация сложных (GC-богатых) последовательностей;
• ПЦР длинных фрагментов (до 20 тыс. п.н.);
• сайт-специфический мутагенез;
• высокопроизводительная ПЦР;
• получение микрочипов.

• более высокий выход ПЦР-продукта при меньших исходных концентрациях матрицы;
• повышенная специфичность по сравнению с обычной Taq ДНК-полимеразой;
• способность синтеза более длинных ампликонов – до 6 тыс. пар нуклеотидов, а в случае вирусной ДНК – до 20 тыс.;
• требуется минимальная оптимизация условий отжига праймера и концентрации Mg^²+ благодаря улучшенному реакционному буферу;
• способность встраивать модифицированные трифосфаты (но не дУТФ).

• рутинная ПЦР;
• высокопроизводительная ПЦР;
• генотипирование.

• 200 реакций по 50 мкл:
v 2Х мастер-микс DreamTaq – 4 × 1,25 мл;
v вода, не содержащая нуклеаз – 4 × 1,25 мл.

• 1000 реакций по 50 мкл:
v 2Х мастер-микс DreamTaq – 20 × 1,25 мл;
v вода, не содержащая нуклеаз – 20 × 1,25 мл.

• более высокий выход ПЦР-продукта при меньших исходных концентрациях матрицы;
• способность синтеза более длинных ампликонов – до 6 тыс. пар нуклеотидов, а в случае вирусной ДНК – до 20 тыс. пар нуклеотидов;
• требуется минимальная оптимизация условий отжига праймера и концентрации Mg^²+ благодаря улучшенному реакционному буферу;
• минимизировано количество шагов пипетирования при постановке реакции;
• возможность нанесения ПЦР-продуктов на гель без добавления дополнительных реагентов для электрофореза.

• рутинная ПЦР;
• высокопроизводительная ПЦР;
• генотипирование.

• 200 реакций по 25 мкл:
v 2Х мастер-микс DreamTaq Green – 4 × 1,25 мл;
v вода, не содержащая нуклеаз – 4 × 1,25 мл.

• 1000 реакций по 25 мкл:
v 2Х мастер-микс DreamTaq Green – 20 × 1,25 мл;
v вода, не содержащая нуклеаз – 20 × 1,25 мл.

Набор Access RT-PCR предназначен для проведения обратной транскрипции и ПЦР-амплификации специфичной РНК-мишени из тотальной РНК или мРНК.

Все этапы проходят в одной пробирке, что упрощает процесс и снижает риск загрязнения образцов.

В набор входят компоненты для проведения 100 реакций (рабочий объем 50 мкл), включая 25 реакций, содержащих положительный контроль РНК и праймеры.

Состав набора Access RT-PCR

• 500 ед. обратной транскриптазы AMV (5 ед./мкл);
• 500 ед. ДНК-полимеразы Tfl (5 ед./мкл);
• 1 мл реакционного буфера AMV/Tfl (5X);
• 1,25 мл MgSO4 (25 мМ);
• 100 мкл смеси dNTP (по 10 мМ каждого из dATP, dCTP, dGTP и dTTP);
• 50 мкл положительного контроля РНК с носителем;
• 100 мкл контрольного праймера 1 (15 мкМ);
• 100 мкл контрольного праймера 2 (15 мкМ);
• 13 мл воды без нуклеаз.