Обратная транскрипция Выбраны параметры: Диаэм

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

Кроме обратной транскриптазы, набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH₄)₂SO₄, оптимизированные для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК, в том числе содержащих участки повышенной сложности (сильно структурированные или GC-богатые).

Олиго(dT)₁₆ праймер и случайный гексапраймер позволяют более узконаправленно подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК-матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в составе суммарной РНК. Олиго(dT)₁₆ праймер селективно отжигается на полиадениновых последовательностях РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК, содержащих поли(А)-3’-конец. Также можно использовать специфичные праймеры для синтеза определённой последовательности.

Состав набора

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С.

Реагент Riti для стабилизации РНК в разнообразных образцах тканей: головного мозга, сердца, почки, селезенки, печени, яичек, скелетной мышцы, жировой ткани, легких и тимуса, быстро проникает в ткань и стабилизирует клеточную РНК при комнатной температуре, одинаково эффективен для выделения различных типов РНК.

Особенности реагента Riti

Реагент Riti имеет следующие особенности:

• позволяет не проводить немедленную заморозку образца в жидком азоте или выделение РНК с последующей обратной транскрипцией;
• стабилизирует РНК в разнообразных образцах тканей;
• быстро проникает в ткань и стабилизирует клеточную РНК при комнатной температуре;
• используется для длительного хранения образцов тканей без деградации РНК.
• совместим с реагентом RiZol, реагентом TRIzol или иными коммерчески доступными наборами для последующего выделения РНК из ткани;
• перед выделением РНК достаточно просто удалить реагент, дополнительная пробоподготовка при этом не требуется;
• при изоляции взвеси клеток желательно ресуспендировать их в небольшом объеме PBS.

Реагент сохраняет РНК в тканях в течение:

• 1 день при 37 °C;
• 1 неделю при 25 °C;
• 1 месяц при 4 °C;
• до 1 года при -20 °C.

Условия хранения: 18-25 °C.