DAPI — краситель, связывающийся с участками ДНК, обильными азотистыми основаниями А-Т. DAPI используется для хромосомных окрашиваний, в проточной цитофлуориметрии, а также для маркировки ядер в микроскопии с флуоресценцией.

DAPI широко используется для равномерного окрашивания фиксированных клеткок. DAPI не перемещается сквозь клеточные мембраны в низких и нормальных концентрациях, в противном случае может окрасить и живые клетки.

При взаимодействии с РНК флуоресценция будет очень слабая.

Продукт поставляется в виде сухого желтого вещества в герметичной пробирке. При соблюдении условий хранения (защищенное от света место и температура -20 °C) краситель имеет срок хранения 24 месяца или 2 года.

DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндол) — это синий флуоресцентный краситель ДНК, который усиливает флуоресценцию примерно в 20 раз при реагировании с AT-областями dsDNA. Он возбуждается фиолетовой (405 нм) лазерной линией и обычно используется в качестве ядерного контрокрасителя в окрашвании хромосом, флуоресцентной микроскопии, проточной цитометрии.

Спектральные свойства DAPI превращают его в идеальный при использовании с зелеными (Invitrogen Alexa Fluor 488, FITC, GFP) и красными (Invitrogen Alexa Fluor 594, родамин, Invitrogen Texas Red, mCherry, mKate-2) флуорофорами в многоцветных экспериментах.

Как часто используемый вспомогательный липид, DOPE демонстрирует сильные синергические эффекты при изготовлении катионных липосом. Липосомы, созданные с DOPE, были разработаны в виде коммерческих трансфекционных реагентов и широко используются в фундаментальных исследованиях. Кроме того, ДОФЭ также является важным вспомогательным липидом в составах катионных липидов и продаваемых липосомальных вакцинах, таких как Эпаксал и Инфлексал V.

• Регистрационный номер NMPA CDE: /USFDA.
• DMF №: 028884.

Это жидкая среда для фиксации на основе глицерина, разработанная для обеспечения защиты от выцветания флуоресценции во всем видимом и ИК-спектре. Можно использовать практически с любым флуоресцентным красителем или флуоресцентным белком (например, GFP, RFP, mCherry) для достижения яркого сигнала и низкого фона. ProLong Diamond Mountant с DAPI лучше всего использовать для сохранения силы сигнала в течение длительных сеансов визуализации флуоресцентных красителей или флуоресцентных белков во время конфокального лазерного сканирования или микроскопии сверхвысокого разрешения.

При связывании с ДНК DAPI можно обнаружить с помощью традиционного фильтра DAPI под УФ-светом с возбуждением 360 нм и испусканием 460 нм. ProLong Diamond Mountant с DAPI образует оптический путь с показателем преломления (RI) 1,47 при отверждении и обеспечивает более длительное хранение образцов, защищая их от фотообесцвечивания.

ProLong Diamond Mountant с DAPI не обесцвечивается и не сжимается при отверждении. Включение DAPI в формулу среды для заливки Prolong Diamond помогает сохранить ядерное окрашивание для длительного хранения по сравнению с последовательным окрашиванием/заливкой в ​​базовую среду для заливки.

Поставляется готовым к использованию во флаконе-капельнице объемом 2 мл.

Нанесите каплю на образец, накройте покровным стеклом, дайте зафиксироваться и сделайте снимок. Перед добавлением монтирующей среды удалите излишки влаги со слайда, постукивая по боковой стороне слайда или покровного стекла чистой лабораторной салфеткой.

Зафиксируйте образец после добавления монтирующей среды:

• поместите монтируемый образец на ровную сухую поверхность;
• инкубируйте в течение 24 часов при комнатной температуре в темноте.

Плотно закрывайте крышку между использованиями, чтобы предотвратить испарение и затвердевание монтирующей среды во флаконе, и храните в соответствии с рекомендациями на упаковке.

LumiMount DAPI — это готовая к использованию фиксирующая среда на водной основе, содержащая ядерный краситель DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол). Она предназначена для одновременного окрашивания клеточных ядер и герметизации флуоресцентно меченых цитологических или гистологических препаратов. DAPI избирательно связывается с AT-богатыми участками двухцепочечной ДНК, вызывая более чем 20-кратное усиление синей флуоресценции. Максимумы спектра: поглощение — 358 нм, эмиссия — 461 нм.

Характеристики среды

• Объём, мл — 15;
• основа — водная;
• содержит DAPI — да;
• коэффициент преломления (жидкая фаза) — 1,38;
• коэффициент преломления (после частичного высыхания) — до 1,46;
• тип герметизации — полупостоянная;
• условия хранения препарата после монтирования, °С — от +2 до +8;
• совместимость — совместима с большинством стандартных флуорохромов;
• дополнительно — рекомендуется герметизация краёв покровного стекла лаком.

В традиционных протоколах окрашивание ядер и монтирование выполняются раздельно, что увеличивает время подготовки образца и риск повреждения сигнала. Кроме того, без специальных стабилизирующих добавок флуорохромы быстро теряют яркость под микроскопом. Данная среда решает обе задачи за один шаг: обеспечивает чёткую визуализацию ядер и защищает весь флуоресцентный сигнал от фотобелинга благодаря встроенным антифейд-компонентам.

После нанесения среда постепенно концентрируется под покровным стеклом за счёт испарения воды, что приводит к увеличению коэффициента преломления до 1,46 — значения, близкого к оптическим характеристикам стекла. Это улучшает качество изображения при микроскопии. Герметизация считается полупостоянной: препараты можно хранить при +2…+8 °С в темноте в течение нескольких недель. При необходимости покровное стекло легко удаляется путём инкубации слайда в PBS-буфере до полного растворения среды.

Для максимальной долговечности образца рекомендуется дополнительно герметизировать края покровного стекла водонепроницаемым лаком — это предотвратит высыхание и проникновение влаги. Среда совместима с большинством распространённых флуоресцентных меток (FITC, TRITC, Cy3, Alexa Fluor и др.), что делает её универсальным решением для многоцветной микроскопии.

96-луночные глубоколуночные планшеты (deep well) для станций очистки и выделения НК из различных типов биологического материала. Могут использоваться как для пробоподготовки на станциях методом магнитной сепарации, так и для последующего хранения проб. Данные планшеты имеют квадратные лунки и рекомендуются к использованию вместе с соответствующими гребенками наконечников для магнитов.

Характеристики планшета

• Материал — полипропилен (ПП);
• количество лунок — 96;
• объем, мл — 2,2;
• дно лунок — V-образное;
• форма лунок — квадратная;
• буквенно-цифровая разметка;
• срезанный угол A-1 — для правильного размещения планшета в приборе;
• совместимость — станции Auto-Pure 96 (Allsheng), Freedom EVO (TECAN), KingFisher Flex (Thermo FS);
• размеры (Д×Ш×В), мм — 127×85×44,4.

• Типы покрытия: необработанная, культуральная, BD BioCoat, BD PureCoat;
• типы: круглые, специальные с легким захватом Easy-Grip, с нанесенной сеткой;
• диаметр чашек, мм - 35, 60, 100 и 150.

Применяется для фильтрации в фармацевтической и биотехнологической промышленности.

• Материал мембран — дюрапор;
• максимальное давление, бар — 5,5;
• площадь фильтрации, см² — 50;
• диаметр пор — 0,1; 0,22; 0,45; 0,65 мкм.

• Сохраняет высокую выживаемость клеток;
• не влияет на поверхностные рецепторы клеток.

Наконечник для колонки продлевает срок службы Ваших колонок.

Характеристики наконечника

• Внутренний диаметр колонки, мм — 10;
• регулируемая торцевая крышка — наличие.

Наконечник для колонки продлевает срок службы ваших колонок.

Характеристики наконечника

• Внутренний диаметр колонки, мм — 6,6;
• регулируемая торцевая крышка — наличие.

Хроматографические колонки Omnifit EZ имеют возможность регулировать длину колонки.

Особенности колонки

• Боросиликатное стекло;
• равномерное распределение потока внутри колонки;
• подходит для многократного использования;
• подходит для загрузки любых сорбентов;
• комплект поставки: трубка 0,5 метров ПТФЭ (1/16 дюйма), трубка 2 метра ПТФЭ (1/16 дюйма), ПП фитинг ¼-28 UNF, комплект фритт (2 фриты ПЭ 10 мкм, 2 фриты ПТФЭ 10 мкм, 2 фриты ПТФЭ 30 мкм), фитинг конического порта Click-N-Seal 10-32.

Глубоколуночные планшеты для работы на станциях выделения НК моделей популярных моделей KingFisher производителя Thermo FS, могут использоваться для хранения реагентов.

Характеристики глубоколуночных планшетов

• Материал — полипропилен
• количество лунок, шт. — 96;
• форма дна — V-образное;
• совместимость с KingFisher — Flex, Duo Prime, Presto.

Пленка для ПЦР планшетов алюминиевая от производителя Sovtech предназначена для планшетов при транспортировке и долгого хранения образцов при низких температурах.

Характеристики пленки

• Материал — алюминий;
• температура использования, °С — от -40 до +120;
• температура запайки, °С — от +170 до +190;
• размер, мм — 125×80;
• толщина, мкм — 100;
• непрокалываемая;
• устойчивость к растворителям, включая ДМСО;
• влагонепроницаемая;
• сертифицирована на отсутствие ДНКаз, РНКаз, человеческой ДНК и ингибиторов ПЦР;
• пленка работает только при наличии термозапайщика.

Пленка для ПЦР планшетов алюминиевая от производителя Sovtech предназначена для планшетов при транспортировке и долгого хранения образцов при низких температурах.

Характеристики пленки

• Материал — алюминий;
• температура использования, °С — от -40 до +120;
• температура запайки, °С — от +170 до +190;
• размер — 78 мм × 300 м;
• толщина, мкм — 100;
• непрокалываемая;
• для термического запаивания глубоколуночных планшетов (Deep-well) 100 мкм;
  
• устойчивость к растворителям, включая ДМСО;
• влагонепроницаемая;
• сертифицирована на отсутствие ДНКаз, РНКаз, человеческой ДНК и ингибиторов ПЦР;
• пленка работает только при наличии термозапайщика.

• Объем помещений, м³ — от 0,20 до 10;
• расход дезинфектанта, мл/ч — 300;
• объем резервуара для дезинфектанта, мл — 250;
• регулировка угла наклона рабочей части;
• возможность задания циклов дезинфекции;
• время работы от батареи, ч — 2,5;
• габариты, Ш х Г х В, мм — 280 х 255 х 226;
• масса, кг — 7.

Станция выделения НК, белков и клеток из практически любого образца: крови, лизатов, клеток, фекалий, почвы, растительных клеток. Самая популярная, высокопроизводительная станция из семейства станций KingFisher-KingFisher Flex. Большой выбор комплектаций под разные задачи и протоколы, возможность работы с большими объемами образца (до 5 мл), а также с ПЦР плашками. Для крупных медицинских учреждений и научных лабораторий с большим потоком образцов.

Технические характеристики станции KingFisher Flex

• Автоматизированная;
• наличие стандартных протоколов, возможность добавления протоколов пользователем;
• наличие интерфейса RS232;
• производительность — 24 образца;
• объем образца, мкл — от 50 до 5000;
• возможность работы с 24 луночными планшетами с лунками разной формы и глубины;
• функция нагрева до 100 °С;
• 100 протоколов;
• большой ж/к дисплей с подсветкой;
• может быть дополнена автоматическим манипулятором;
• габариты, Ш×Г×В, мм — 680×600×380;
• масса нетто, кг — 28.

Преимущества станций KingFisher Flex:

• автоматизация рутинных стадий выделения и очистки;
• функция нагрева, возможность проведения лизиса с помощью станции;
• отсутствие перекрестной контаминации образцов;
• мощные магниты, позволяют полностью забрать образец из лунки;
• протокол процесса виден на мониторе станции или в программном обеспечении на компьютере.

Станции выделения НК, белков и отдельных клеток KingFisher Apex работает на основе технологии магнитной сепарации клеток. KingFisher Apex подходят для сложных протоколов выделения, требующих дозирования разных объемов и разного приемного пластика. Возможно работать как с плашками, так и с пробирками, а наличие сканнера штрих-кодов позволит отслеживать партию пластика.

Новые возможности от Apex:

• расширенные форматы пластика, возможность элюции в том числе в пробирках;
• возможность установки сразу двух голов, станция сама определит нужную к использованию в зависимости от протокола;
• большой touch screen дисплей с простым меню;
• работа с маленькими объемами образца;
• контроль нагрева и охлаждения с помощью встроенного блока нагрева/охлаждения;
• обучающая программа SmartStart для легкого запуска станции и протокола в первый раз;
• сканнер штрих-кодов для дальнейшего занесения номера партии планшет в протокол.

Технические данные станции Apex:

• автоматизированная;
• рабочие объемы, мкл:
  • от 15 до 200 (стандартная 96-канальная голова);
  • от 15 до 1000 (глубоколуночная 96-канальная голова);
  • от 20 до 80 (ПЦР-плашка);
  • от 30 до 5000 (24-луночная голова);
  • от 30 до 200 (96 пробирок по 0,5 мл с баркодом);
  • от 200 до 1000 (24 пробирки с баркодом);
• очистка 24-96 образцов за 25-65 минут;
• две встроенных УФ-лампа для деконтаминации;
• встроенное программное обеспечение;
• возможность докупить ПО Bendix для установки на компьютер;
• сканер штрих кодов для загрузки информации об образце и пластике в программное обеспечение;
• встроенная память для записи протоколов на 30 Гбайт;
• возможность загрузить готовы протоколы из библиотеки или записать пользовательские;
• возможность связи с облачным сервером для загрузки новых протоколов;
• габариты, Ш×Г×В, мм — 780×590×450;
• масса нетто, кг — 56.

• Типы покрытия: необработанная, культуральная, BD BioCoat, BD PureCoat;
• типы: круглые, специальные с легким захватом Easy-Grip, с нанесенной сеткой;
• диаметр чашек, мм - 35, 60, 100 и 150.

Lum V500 — люминесцентный тринокулярный инвертированный микроскоп. Модель в базовой комплектации обеспечивает работу в режимах светлого поля, фазового контраста и люминесценции. Возможна дополнительная комплектация камерой, монитором. В V500L источниками света выступают светодиоды, в V500 — ртутная и галогенная лампы. За счет разницы в источниках света модель V500L является узкополосным люминесцентным микроскопом, V500 — широкополосным люминесцентным микроскопом.

Общие характеристики и особенности MAGUS V500

• Увеличение, крат. — 100 – 400;
• методы исследования: ЛЮМ, СП, ФК;
• объективы планахроматы:
  • PLL 10×, NA 0,25
  • PLL 20×, NA 0,40;
  • PLL 40×, NA 0,60 (пружинящая оправа);
• объективы фазовые:
  • PLL 10×, NA 0,25 PHP2;
  • PLL 20×, NA 0,40 PHP2;
  • PLL 40×, NA 0,60 PHP2;
• количество гнезд в револьвере, шт — 6;
• окуляры — 10×/22;
• предметный столик, мм — 227×208;
• NA конденсора — 0,6;
• центрирующий микроскоп фазово-контрастного блока — наличие;
• настройка по по Кёлеру — наличие.
• освещение Lum V500:
  • проходящий свет: галогенная лампа 12 В/30 Вт (регулировка яркости);
  • отраженный свет: ртутная лампа 100 Вт.
• Освещение Lum V500L:
  • проходящий и отраженные свет: светодиоды 5 Вт.

Фильтры возбуждения люминесценции микроскопа MAGUS Lum V500

Фильтры люминесценции микроскопа MAGUS Lum V500L

Опции:

• окуляр 10х/22 мм со шкалой (арт. 82915),
• окуляр 12,5х/14 мм (арт. 82916),
• окуляр 12,5х/14 мм с диоптрийной коррекцией (арт. 82917),
• окуляр 15х/15 мм (арт. 82918),
• окуляр 20х/12 мм (арт. 82919),
• окуляр 20х/12 мм с диоптрийной коррекцией (арт. 82920),
• окуляр 25х/9 мм (арт. 82921),
• объектив 4х/0,10 Plan ∞/0,17 (арт. 83712).

Система Evos M3000 — это компактная и универсальная цифровая система для клеточной визуализации, сочетающая флуоресценцию, цветное изображение, светлое поле и фазовый контраст в одном приборе. Идеальное решение для рутинного контроля клеточных культур и исследований in vitro. Простой интерфейс, сенсорный экран и минимальные требования к обучению делают Evos M3000 удобным инструментом для любой лаборатории. Эта система автоматически и точно измеряет плотность клеточной популяции в режиме реального времени.

Технические характеристики системы визуализации Evos M3000

• Визуализация в светлом поле и фазовом контрасте;
• двухцветная флуоресцентная микроскопия;
• автоматическое измерение степени конфлюэнтности в реальном времени;
• 4-позиционный револьвер;
• высокочувствительная цветная CMOS-камера (3,2 Мп);
• 10,1-дюймовый сенсорный ЖК-дисплей (1920×1200);
• фокусировка: ручная и сенсорная с разрешением 0,15 мкм;
• цветная CMOS-камера, 3,2 Мп (2064×1536 пикселей);
• размер пикселя, мкм — 3,45;
• 10,1-дюймовый сенсорный ЖК-дисплей с разрешением 1920×1200;
• размер предметного столика, см — 17,9×22,9;
• встроенный компьютер с 8 ГБ ОЗУ и SSD 120 ГБ;
• интерфейсы: USB 3.0, USB 2.0, Wi-Fi, поддержка сетевых подключений (SMB) и облачных платформ (OneDrive, Thermo Fisher Connect Platform);
• форматы изображений: TIFF, PNG, JPG (8-бит), видео — MP4;
• сохранение данных на SSD, USB-устройства, в сеть и в облако (OneDrive, Thermo Fisher Connect Platform);
• габариты (Ш×Г×В), мм — 297×485×323;
• вес, кг — 8,3.

Система совместима со всеми типичными лабораторными ёмкостями:

• микроскопические и культуральные слайды;
• гемоцитометры;
• микропланшеты (6-384 лунки);
• чашки Петри (35-100 мм);
• флаконы T-25, T-75, T-175.

Аксессуары и опции:

• для стандартных задач визуализации в светлом поле и фазовом контрасте набор Evos Objective Starter Kit for Brightfield/Phase Contrast (арт. AMEP5009) — включает ахроматические объективы 4X, 10X и 20X.
• для работ с флуорофорами набор Evos Objective Starter Kit for Fluorescence/Brightfield/Phase Contrast (арт. AMEP5010) — включает флюоритовые объективы 4X, 10X и 20X с повышенной прозрачностью в флуоресцентном диапазоне.

Светодиодные модули (light cubes) легко заменяются пользователем и автоматически распознаются системой. Предлагаются в составе готовых стартовых наборов:

• Evos Light Cube Starter Kit, GFP, Texas Red (арт. AMEP5015) — включает модули для зелёной и красной флуоресценции. Подходит для работы с GFP, mCherry, LysoTracker и другими популярными красителями.
• Evos Light Cube Starter Kit, DAPI, GFP, Texas Red (арт. AMEP5016) — трёхканальный набор для визуализации ядра (DAPI), зелёных и красных маркеров. Универсальное решение для многоцветной флуоресценции.
• Evos Light Cube Starter Kit, DAPI, GFP (арт. AMEP5018) — базовый набор для двухцветной флуоресценции: содержит два световых куба Evos второго поколения: DAPI 2.0 и GFP 2.0.
• Evos M3000 Attachable Mechanical Stage (арт. AMEP5011) — механический X-Y столик для точного позиционирования образцов. Обеспечивает надёжную фиксацию планшетов, чашек и других ёмкостей. Удобен при работе с крупными или нестандартными образцами.
• Extended Warranty Package (арт. A40001411) — расширенная гарантия на систему Evos M3000 для долгосрочной эксплуатации в условиях интенсивного использования.

Набор реагентов TSAPLus предназначен для двойной иммунофлуоресцентной окраски тремя цветами (IF488+ Red IF555 и DAPI) парафиновых срезов, в частности для двойной флуоресцентной иммуноразметки первичных антител из одного источника, а также для иммуноразметки антител из разных источников.

Основной принцип состоит в технологии усиления сигнала тирамида (TSA, Tyramide Signal Amplification). Принцип TSA заключается в применении пероксидазной реакции тирамида (флуоресцентно меченая соль тирамида образует ковалентную связь с участками связывания под действием HRP-катализированного пероксидом водорода (H₂O₂)), что приводит к множественным ферментативным реакциям. Продукт связывается с окружающими белковыми остатками (в том числе триптофан, гистидин и тирозин), формируя большое количество флуоресцентных отложений в месте связывания антигена с антителом, что способствует усилению сигнала.

Множественное флуоресцентное окрашивание также возможно за счёт повторной иммуноразметки с использованием различных флуоресцентных тирамидаз.

Если сравнивать с другими флуоресцентными наборами двойного окрашивания TSA, данный набор заменяет FITC-Tyramide и CY3-Tyramide на iF488-Tyramide и iF555-Tyramide, обеспечивая сильнее и стабильнее флуоресцентные сигналы.

Данные спектра флуоресценции соответствующих флуоресцентных красителей в наборах TSA

Условия хранения и транспортировки

Каждый компонент набора хранится при рекомендуемых условиях. Комплект транспортируется на влажном льду. Срок годности — 1 год.

Состав набора

Подготовка к эксперименту

• Приготовить 0,01 М фосфатно-солевой буфер (PBS) (рН 7,0-7,4), 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂.
• Приготовить первичные антитела и соответствующие HRP-меченные вторичные антитела, а также раствор для восстановления антигена (выбрать подходящий в зависимости от типа ткани и антитела).
• В соответствии с таблицей ниже приготовить рабочий раствор TSA для окрашивания.

• После размораживания флуоресцентного тирамида пробирку кратковременно центрифугируют, затем тщательно перемешивают.
• Раствор TSA готовится непосредственно перед использованием, хранится в тёмном месте при 4 °С и остаётся эффективным в течение 24 часов.
  

Экспериментальный протокол (пример для тканевых срезов)

• Обезвоживание и гидратация срезов.
• Реставрация антигена: в зависимости от используемого первичного антитела и типа ткани выбирают подходящий метод.
• Промывка PBS: 3 раза по 5 минут, затем нанесение защитной маркировки (используйте гидрофобный маркер для иммуногистохимии Pap Pen).
• Блокирование эндогенной пероксидазы: покрыть ткани 3% H₂O₂, инкубировать 25 минут в темноте при комнатной температуре. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Блокирование неспецифического связывания: нанести 3% BSA или сыворотку на 30 минут.
• Инкубация с первичным антителом: развести антитело в PBS, инкубировать в увлажнённой камере при 4 градусах на ночь. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Инкубация с HRP-меченным вторичным антителом: развести в PBS, инкубировать 50 минут при комнатной температуре. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Окрашивание TSA-488: нанести 50-100 мкл раствора, инкубировать 10 минут в темноте. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Тепловая обработка в микроволновке: помещают срезы в буфер восстановления антигена, нагревают до 95 градусов на 15 минут.
• Повторная инкубация со вторым первичным антителом: аналогично шагу 6.
• Повторная инкубация с HRP-меченным вторичным антителом: аналогично шагу 7.
• Окрашивание TSA-555: аналогично шагу 8.
• Окрашивание ядра DAPI: инкубация 10 минут в темноте, промывка PBS.
• Гашение аутофлуоресценции (опционально): обработка судановым черным (Sudan Black B) 5 минут, промывка проточной водой 3 минуты.
• Закрепление и микроскопия: нанести антифлуоресцентный гаситель, запечатать срез, наблюдать под флуоресцентным или конфокальным микроскопом.

Примечания

• По сравнению с флуоресцентными вторичными антителами, набор TSA обеспечивает высокую чувствительность и мощный сигнал, поэтому концентрацию первичного антитела следует уменьшить в 5-10 раз по сравнению с обычными рекомендациями.
• При сильном фоновом свечении добавить этап гашения аутофлуоресценции.
• Рекомендуемое разведение флуоресцентного тирамида — 1:500 (можно варьировать от 1:200 до 1:1000).
• При множественной флуоресцентной окраске сначала инкубируют поликлональное антитело, затем моноклональное. Также сначала обрабатывают высокоэкспрессируемые белки, затем низкоэкспрессируемые.

Специализированный набор TSAPlus предназначен для двойного иммунофлуоресцентного окрашивания гистологических срезов, заключенных в парафин. Он позволяет эффективно визуализировать две различные мишени при использовании первичных антител, полученных от одного и того же вида животных, сохраняя при этом возможность работы с антителами из разных источников.

В основе метода лежит высокоэффективная технология амплификации тирамидного сигнала (TSA). В ходе каталитического цикла под воздействием пероксидазы хрена (HRP) и пероксида водорода (H₂O₂) происходит активация меченого тирамида с образованием реакционноспособных радикалов. Эти радикалы формируют устойчивые ковалентные связи с тирозиновыми остатками белков непосредственно в месте локализации антигена. Такой механизм обеспечивает многократное усиление интенсивности свечения за счет накопления плотного слоя флуорофоров в целевой зоне.

Комплект включает усовершенствованные флуоресцентные красители двух разных спектров iF488 (зеленый) и iF594 (красный), конъюгированные с тирамином. В сравнении с предыдущим поколением реагентов (серия G1235), данные красители обладают оптимизированными оптическими характеристиками: повышенной яркостью и улучшенной фото-стабильностью. Это гарантирует получение контрастных изображений и высокую чувствительность детекции при проведении мультиплексного анализа.

Технические характеристики набора

• Количество тестов — 50 или 100;
• срок хранения набора составляет 12 месяцев при соблюдении соответствующих условий;
• срок годности готового раствора — 24 часа.

Ниже приведены данные флуоресцентного спектра красителей, входящих в состав наборов для флуоресцентного окрашивания серии TSA

• iF488-Tyramide — 25 мкл (G1259-50T), 2×25 мкл (G1259-100T), хранить при -20 °C;
• iF594-Tyramide — 25 мкл (G1259-50T), 2×25 мкл (G1259-100T), хранить при -20 °C;
• разбавитель для тирамида — 100 мл (G1259-50T), 2×100 мл (G1259-100T), хранить при +4 °C;
• DAPI (готовый к использованию) — 10 мл (G1259-50T), 20 мл (G1259-100T), хранить при +4 °C;
• подавитель автоматической флуоресценции (Sudan Black B) — 10 мл (G1259-50T), 20 мл (G1259-100T), хранить при комнатной температуре;
• антифейд-монтажная среда — 5 мл (G1259-50T), 10 мл (G1259-100T), хранить при -20 °C;
• инструкция, шт. — 1.

Протокол использования:

• Предварительные шаги эксперимента:
• подготовить 0,01 М PBS-буфер (pH 7,0-7,4), 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂;
  
• подготовить первичные антитела и соответствующие вторичные антитела, меченные HRP;
  
• подготовить раствор для восстановления антигена (используйте подходящий раствор в соответствии типу антител и ткани).
• Приготовление рабочего раствора TSA:
• смешайте компоненты согласно таблице ниже:

Примечание: рабочий раствор TSA рекомендуется готовить непосредственно перед применением. Хранить его следует при +4 °C в защищенном от света месте, срок годности раствора — 24 часа.

Шаги протокола:

• депарафинизируйте срезы ткани до воды;
• проведите восстановление антигена (выберите подходящий метод в зависимости от типа ткани и антител);
• промойте ткань PBS 3 раза по 5 мин;
• блокируйте эндогенную пероксидазу 3% H₂O₂ в течение 25 мин при комнатной температуре в темноте;
• заблокируйте неспецифические сайты связывания 3% BSA или сывороткой в течение 30 мин;
• инкубируйте первичные антитела при 4 °C в течение ночи;
• инкубируйте вторичные антитела, меченные HRP, при комнатной температуре в течение 50 мин;
• добавьте рабочий раствор TSA-488 и инкубируйте 10 мин в темноте;
• проведите микроволновую обработку для удаления связанных антител;
• повторите шаги для второго первичного антитела и TSA-594;
• проведите контрастирование ядер DAPI;
• при необходимости проведите подавление автотоматической флуоресценции;
• закрепите срезы антифейд-монтажной средой и исследуйте под флуоресцентным микроскопом;

Примечания:

• концентрацию первичных антител рекомендуется снижать в 5-10 раз для уменьшения неспецифического фона;
• если фоновая флуоресценция слишком яркая, добавьте шаг подавления автоматической флуоресценции;
• рекомендуемое разведение флуоресцентного тирамида — 1:500 (диапазон 1:200-1:1000);
• для многоцветного мечения рекомендуется предварительно инкубировать поликлональные антитела, затем моноклональные.

Набор предназначен для многоцветного иммуногистохимического флуоресцентного окрашивания (iF488, iF555, iF647 и DAPI) парафиновых срезов, особенно для иммуноокрашивания первичных антител из одного источника.

Принцип работы набора основан на технологии усиления сигнала тирамида (TSA). В процессе каталитической активности HRP (хреновой пероксидазы) флуоресцентно-меченный тирамин также катализируется, его продукты связываются с белковыми остатками (триптофан, гистидин, тирозин) в области связывания антигена и антитела, что усиливает сигнал.

Этот набор использует флуоресцентные красители 488/555/647 для мечения тирамида. Полученные флуоресцентные молекулы обеспечивают стабильный и яркий сигнал, что позволяет проводить повторное иммуномечение для многократного флуоресцентного окрашивания.

Флуоресцентный спектр используемых красителей

Условия хранения и транспортировки

Каждый компонент набора хранится при рекомендуемых условиях. Комплект транспортируется на влажном льду. Срок годности — 1 год.

Состав набора

Подготовка к эксперименту

• Приготовьте 0,01 моль/л PBS (pH 7,0-7,4) (рекомендуется G4202 или G0002), 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂.
• Подготовьте первичные антитела, соответствующие HRP-меченные вторичные антитела и раствор для восстановления антигена (подбирается в зависимости от антитела и типа ткани).
• Подготовьте рабочие растворы TSA в соответствии с таблицей:

Примечание: перед использованием центрифугируйте флуоресцентный тирамид. Готовый рабочий раствор храните при 4 градусах в темноте, использовать в течение 24 часов.

Применение

• Подготовка образца: депарафинизация и регидратация тканевого среза стандартным методом IHC.
• (Опционально) Восстановление антигена: обработка ткани в растворе для восстановления антигена, затем промывка PBS (3×5 мин).
• Ограждение области ткани: используйте гидрофобный маркер для иммуногистохимии Pap Pen.
• (Опционально) Гашение аутоглюоресценции: нанесение 100 мкл раствора A на 30 мин, затем промывка.
• Блокирование эндогенной пероксидазы: 3% H₂O₂ на 25 мин в темноте.
• Блокирование неспецифического связывания: 100-150 мкл 3% BSA или сыворотки на 30 мин.
• Окрашивание 1-м флуорофором (488)
• Инкубация с первичным антителом (4 градуса, в темноте).
• Промывка PBS (3×5 мин).
• Инкубация с HRP-меченным вторичным антителом (50 мин, комнатная температура).
• Промывка PBS (3×5 мин).
• Инкубация с TSA-488 (10 мин в темноте), затем промывка.
• Тепловая обработка: удаление антител и повторное окрашивание вторым антителом.
• Окрашивание 2-м флуорофором (555): повторение шага 7 с TSA-555.
• Окрашивание 3-м флуорофором (647): повторение шага 7 с TSA-647.
• Контрастное окрашивание ядер: 100-150 мкл DAPI (10 мин, в темноте).
• Промывка PBS (3×5 мин).
• (Опционально) Повторное гашение аутоглюоресценции: обработка раствором B (30 мин), затем промывка.
• Анализ: монтирование покровного стекла с антифлуоресцентным агентом и визуализация на микроскопе.

Примечания

• Последовательность окрашивания (488, 555, 647) можно менять.
• Оптимизируйте условия эксперимента для максимальной специфичности сигнала.
• Возможные проблемы и их решения:

Монтирующая среда с защитой от выцветания флуоресценции — это готовый водный реагент для фиксации микропрепаратов, предназначенный для одновременного окрашивания ядер и сохранения флуоресцентного сигнала в клетках и тканях. DAPI— это проникающий сквозь мембрану сине-флуоресцентный краситель, который избирательно связывается с двухцепочечной ДНК, после связывания интенсивность флуоресценции возрастает более чем в 20 раз, при этом краситель не взаимодействует с одноцепочечной ДНК. Экспозиционные максимумы: возбуждение — 364 нм, эмиссия — 454 нм (в комплексе с ДНК).

Характеристики среды

• Объём, мл — 25;
• тип — водная монтирующая среда с антифейд-эффектом;
• содержит DAPI — да;
• условия хранения — при –20 °С в темноте;
• срок годности — 12 месяцев.

Традиционно окрашивание ядер и герметизацию препарата выполняют в два отдельных этапа, что увеличивает время подготовки образца и риск повреждения флуоресцентного сигнала. Кроме того, без специальных антифейд-добавок флуорохромы быстро теряют яркость под воздействием света, особенно при длительном хранении или повторных просмотрах. В некоторых лабораториях для продления флуоресценции используют самодельные монтажные среды, однако их состав может быть нестабильным, а эффективность — непредсказуемой.

Для обеспечения воспроизводимости результатов, экономии времени и максимальной сохранности сигнала мы рекомендуем использовать готовую монтажную среду с DAPI. Особенно она подойдёт для лабораторий, где важна стандартизация протоколов (например, в исследованиях, связанных с количественной флуоресцентной микроскопией), а также для небольших исследовательских групп, которым нецелесообразно готовить реагенты вручную. Достаточно нанести одну каплю средства на образец и накрыть покровным стеклом — ядерное окрашивание и герметизация завершены за один шаг.

Важно: после вскрытия препарат следует хранить при +4 °С в темноте (рекомендуется использовать тёмную коробку для слайдов).

Набор TSAPlus (6 меток, 7 цветов) предназначена для проведения высокоспецифичного многоцветного иммунофлуоресцентного окрашивания гистологических препаратов в парафиновых срезах. Набор позволяет осуществлять мультиплексную детекцию как для первичных антител, полученных от одного вида-продуцента, так и для антител из различных источников.

Функционирование системы базируется на методе амплификации тирамидного сигнала (TSA). В основе данной технологии лежит каталитическая реакция: под воздействием пероксидазы хрена (HRP) и пероксида водорода (H₂O₂) активированный тирамид, сопряженный с флуорофором, формирует устойчивые ковалентные связи с тирозиновыми остатками белков в непосредственной близости от эпитопа. Процесс обеспечивает локальное накопление высокой концентрации флуорофора в зонах формирования комплекса «антиген-антитело», что гарантирует существенное усиление интенсивности сигнала.

Спектральный диапазон набора обеспечивается набором тирамин-меченых красителей: iF440, iF488, iF546, iF594, iF647 и iF700. Данные реагенты характеризуются высокой эффективностью и фото-стабильностью, что позволяет проводить последовательные циклы иммуноокрашивания без потери качества визуализации и достигать многоцветного окрашивания.

Допускается модификация протокола путем интеграции дополнительных флуоресцентных меток, соответствующих оптическим характеристикам используемой системы детекции (микроскопа). Для верификации совместимости сторонних красителей и оптимизации конфигурации системы рекомендуется консультация со специалистами технической поддержки производителя.

Технические характеристики набора

• Количество тестов — 50;
• срок хранения набора составляет 12 месяцев при соблюдении соответствующих условий;
• срок годности готового раствора — 24 часа.

Ниже приведены данные флуоресцентного спектра красителей, входящих в состав наборов для флуоресцентного окрашивания серии TSA

Компоненты набора и условия хранения:

• iF440-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF488-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF594-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF647-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF700-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
  
• разбавитель для тирамида — 100 мл, хранить при +2-8 °C;
• DAPI (готовый к использованию) — 10 мл, хранить при +2-8 °C;
• подавитель автоматической флуоресценции (Sudan Black B) — 10 мл, хранить при комнатной температуре;
• антифлуоресцентный закрепитель — 5 мл, хранить при -20 °C;
• инструкция, шт. — 1.

Протокол использования:

• Подготовка перед экспериментом:
• подготовьте раствор для восстановления антигена (рекомендуется использовать цитратный буфер pH 6,0 или Tris-EDTA буфер pH 8,0/9,0);
• подготовьте PBS-буфер, TBST-буфер, 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂;
• подготовьте сыворотки для блокирования (рекомендуется бычий сывороточный альбумин (BSA), нормальная сыворотка осла, кролика или козы);
  
• подготовьте первичные антитела и соответствующие вторичные антитела, меченные HRP.
  
• Приготовление рабочего раствора TSA:
• смешайте компоненты согласно списку:

Способ применения: рабочий раствор TSA рекомендуется готовить непосредственно перед применением. Хранить его следует при +4 °C в защищенном от света месте, срок годности раствора — 24 часа.

Набор для многоцветного флуоресцентного окрашивания TSAPlus дает возможность проводить иммунофлуоресцентное окрашивание парафиновых срезов, используя 5 меток и 6 цветов. Он особенно удобен, если нужно пометить несколько первичных антител единого происхождения, но также может применяться и с антителами, полученными из различных источников.

Принцип действия базируется на методике TSA (Tyramide Signal Amplification). Суть метода заключается в пероксидазной реакции тирамида: флуоресцентно-меченый тирамид создает прочные ковалентные связи с тирозиновыми остатками белков антигена и окружающего матрикса под воздействием HRP и H₂O₂. Это приводит к заметному усилению сигнала за счет накопления значительного количества флуорофора в месте связывания антигена с антителом.

В комплекте поставляются тирамин-меченые красители iF440, iF488, iF546, iF594 и iF647. Они обеспечивают яркую и стабильную флуоресценцию, что позволяет повторять процедуру иммуноокрашивания несколько раз для получения многоцветного изображения.

Лаборанты могут комбинировать эти красители с другими подходящими флуоресцентными соединениями. Выбор зависит от источника света, установленного в системе визуализации. Чтобы уточнить совместимость красителей, рекомендуется связаться с технической поддержкой производителя.

Технические характеристики набора

• Количество тестов — 50;
• срок хранения набора составляет 12 месяцев при соблюдении соответствующих условий;
• срок годности готового раствора — 24 часа.

Ниже приведены данные флуоресцентного спектра красителей, входящих в состав наборов для флуоресцентного окрашивания серии TSA

Компоненты набора и условия хранения:

• iF440-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF488-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF546-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF594-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF647-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• разбавитель для тирамида — 100 мл, хранить при +2-8 °C;
• DAPI (готовый к использованию) — 10 мл, хранить при +2-8 °C;
• подавитель автоматической флуоресценции (Sudan Black B) — 10 мл, хранить при комнатной температуре;
• антифейд-монтажная среда — 5 мл, хранить при -20 °C;
• инструкция, шт. — 1.

Протокол использования:

• Подготовка перед экспериментом:
• подготовьте раствор для восстановления антигена (рекомендуется использовать цитратный буфер pH 6,0 или Tris-EDTA буфер pH 8,0/9,0);
• подготовьте PBS-буфер, TBST-буфер, 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂;
• подготовьте сыворотки для блокирования (рекомендуется бычий сывороточный альбумин (BSA), нормальная сыворотка осла, кролика или козы);
  
• подготовьте первичные антитела и соответствующие вторичные антитела, меченные HRP.
  
• Приготовление рабочего раствора TSA:
• cмешайте компоненты согласно таблице ниже:

Примечание: рабочий раствор TSA рекомендуется готовить непосредственно перед применением. Хранить его при +4 °C в защищенном от света месте, срок годности раствора — 24 часа.

Набор TSAPlus представляет собой решение для многоцветного флуоресцентного иммуноокрашивания парафиновых срезов с использованием четырех меток и пяти различных цветов. Он идеально подходит для многократного мечения первичных антител, полученных из одного или разных источников.

Принцип действия реагентов TSAPlus основывается на технология усиления сигнала тирамидом (TSA). Механизм действия включает пероксидазную реакцию: флуоресцентно-меченый тирамид ковалентно связывается под воздействием пероксидазы хрена (HRP) и H₂O₂ с тирозиновыми остатками белков мишени (антигена) и окружающего матрикса. Это обеспечивает значительное усиление сигнала, поскольку большее количество флуорофора осаждается непосредственно в области взаимодействия антигена и антитела.

В состав набора входят тирамин-меченые флуоресцентные красители (iF440, iF488, iF594 и iF647). Эти соединения отличаются высокой яркостью и стабильностью сигнала, что делает возможным проведение множественных циклов иммуноокрашивания для достижения желаемого многоцветного результата.

Пользователи также могут использовать другие подходящие флуоресцентные красители, исходя из характеристик своего оборудования для флуоресцентной визуализации. Для получения дополнительной информации о совместимости красителей обращайтесь в техническую поддержку производителя.

Технические характеристики набора

• Количество тестов — 50;
• срок хранения набора составляет 12 месяцев при соблюдении соответствующих условий;
• срок годности готового раствора — 24 часа.

Ниже приведены параметры флуоресцентного спектра красителей, входящих в состав реагентов серии TSA

Компоненты набора и условия хранения:

• iF440-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF488-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF594-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF647-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• разбавитель для тирамида — 100 мл, хранить при +4 °C;
• DAPI (готовый к использованию) — 10 мл, хранить при +4 °C;
• подавитель автоматической флуоресценции (Sudan Black B) — 10 мл, хранить при комнатной температуре;
• антифлуоресцентный закрепитель — 5 мл, хранить при -20 °C;
• инструкция, шт. — 1.

Протокол использования:

• Подготовка перед экспериментом:
• подготовьте раствор для восстановления антигена (рекомендуется использовать цитратный буфер pH 6,0 или Tris-EDTA буфер pH 8,0/9,0);
• подготовьте PBS-буфер, TBST-буфер, 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂;
• подготовьте антитела (первичные и соответствующие им вторичные), меченные пероксидазой хрена.
• Приготовление рабочего раствора TSA:
• cмешайте компоненты согласно списку:

Способ применения: рабочий раствор TSA рекомендуется готовить непосредственно перед применением. Хранить его следует при +4 °C в защищенном от света месте, срок годности раствора — 24 часа.