Мы приняли вашу заявку, свяжемся с вами в ближайшее время.
История
История
Содержание статьи:
Эта публикация отражает содержание доклада «Клеточный анализ: биоимиджинг и флуоресцентная микроскопия — комплексные решения и рутинные микроскопы», вошедшего в программу мультиконференции «Life Sciences, биотехнологии и аналитическая химия в современных условиях. Взгляд на Восток?», состоявшейся 9 ноября 2022 г. в Москве.
Специалист «Диаэм» Сергей Ирхин посвятил свое выступление техническим решениям в области клеточного анализа, рассказав о «старых приятелях» и «новичках» (ZOE и EzScope 101 Live Cell Imaging System) в аппаратном обеспечении лаборатории клеточного биолога, а также об актуальных поставщиках счетчиков клеток, планшетных ридеров и реагентов для визуализации и клеточного анализа, красителей и антител для флуоресцентной микроскопии, вспомогательного оборудования.

Итак, что же может предложить «Диаэм» на момент прочтения доклада в области подготовки клеток к культивированию и хранению?
Под системами визуализации следует понимать как классические микроскопы, так и различные цифровые решения, такие как разные варианты планшетных ридеров, а также решения в области проточной цитометрии.
Прежде всего стоит с сожалением отметить, что многие известные и очень популярные бренды покинули Россию, после чего компанией «Диаэм» была проведена грандиозная работа с целью подобрать более или менее адекватные аналоги оборудования, поставки которого больше не могли быть продолжены.
Автор отметил, что эту работу до сих пор (на момент доклада) нельзя считать завершенной, поскольку остались решения, для которых не удалось найти адекватную замену. Тем не менее широкий круг общелабораторных задач, которые стоят в каждой клеточной лаборатории, все же был закрыт компанией. В частности, речь о поставках сред и пластика, а также о найденных уникальных решениях в области перепрограммирования и трансфекции.

Что же касается оборудования для клеточного анализа, его назначение понятно: это анализ апоптоза, жизнеспособности, оценка динамики роста культур после посева, изучение пролиферативной активности, фенотипирование и многое другое.
Проблемы аппаратного обеспечения клеточной биологии нередко остаются за кадром: когда мы знакомимся с красиво оформленными статьями в Nature, то как читатели не видим работы, которую проделал исследователь по решению проблем получения первичной культуры из ткани, подбора сред и условий для культивирования клеток, а также поддержания безопасности заморозки и хранения препаратов.
Если говорить о реагентах, то ввиду ограничения доступности антител таких производителей как Thermo и Abcam такая продукция все еще доступна, но цены и сроки поставки, мягко говоря, негуманны.

В настоящее время «Диаэм» представляет еще три компании: Arigobio, Servicebio и ABclonal.
Все три этих производителя — новые для российского рынка, и то, что они представляют — это откровенно не Abcam и не Thermo FS. Но при этом они стремятся к соответствующему уровню своей продукции и принимают рекламации по качеству производимых ими антител. Понятно, что выбор таких антител гораздо скромнее в сравнении с ассортиментом именитых производителей, но тем не менее, например, ABclonal каждый месяц анонсирует какие-то новые свои товары. Опыт взаимодействия с этими поставщиками показывает, что к ним точно имеет смысл присмотреться.
Компания Servicebio сфокусирована в области иммуногистохимии, иммуноцитологии и иммуноблоттинга.
Arigobio в своей стратегии идет по стопам компании Abcam: у них очень хороший сайт и толковый фильтр для подбора антител. Кроме того, у этой компании на сайте очень хорошо реализована информация о публикациях — о том, в каких работах использованы какие антитела: пользователь может посмотреть, как, кто берет и где использует те или иные антитела, и сделать вывод о том, подходят они ему в определенном исследовании или нет.
Если говорить об окрашивании клеточных структур, то опять же следует отметить: все красители из Европы попали в санкционный список, поэтому специалисты «Диаэм» были вынуждены искать аналоги. Из того, что компания может предложить сейчас — это внутриклеточные красители от Servicebio: различные варианты растворов Хёхста, ДАПИ, пропидий иодид, наборы с фаллоидином (красный, зеленый), красители для оценки мембранного потенциала, а также для окраски клеточной мембраны. Так что в принципе базовые красители для замены поставляемых прежде подобраны.

Нужно только понимать, что в конце года информация о наличии на складе быстро теряет актуальность, поэтому покупателям рекомендуется заблаговременно сообщать о том, что им необходимо. Если компания знает, что к товару существует определенный интерес, объемы его заказов у поставщика будут соответственным образом увеличены под потребности покупателей.

Для окрашивания внутриклеточных структур также доступны наборы от Servicebio и Vazyme: это наборы Click-iT EdU для окраски хроматином, для определения жизнеспособности по кальцеину, а также набор для определения пролиферации ,методом MTT, причем он подойдет и для микроскопии, и для анализа в планшетном формате.
Также есть наборы для определения апоптоза методом TUNEL по окраске анексина и набор для определения ранних этапов апоптоза и клеточного цикла Наборы хорошо себя показали в работе методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии, так что при наличии таких задач можно обращаться в «Диаэм» — компания предложит соответствующую продукцию.
В лаборатории очень часто возникает необходимость подсчитать количество живых и мертвых клеток – как после получения первичной культуры, так и после разморозки всегда полезно знать, сколько живых клеток у исследователя находится в суспензии.
Считать клетки можно классически в камере Горяева, а можно использовать довольно быстрый метод анализа с использованием различных счетчиков.
Принцип окраски в камере Горяева и любых счетных камерах, а также в упомянутых счетчиках один и тот же: используется метод окраски мертвых клеток трипановым синим. Живые клетки устойчивы к воздействию трипанового, мертвые окрашиваются. Далее разница заключается лишь в том, как фиксируется это событие: либо прибором, который сам все фиксирует и впоследствии выдает гистограмму распределения по размеру и процентному содержанию живых и мертвых клеток, либо визуально (глазами).
Если говорить об аналогах всем известной системы Countess, китайская компания RWD создала, строго говоря, клон системы Countess 3 FL для подсчета процентного соотношения живых и мертвых клеток — прибор C100.
Прибор этот довольно прост, по софту и функционалу дублирует систему Countess и даже имеет такие же кубы для подсчета клеток по флуресцентному сигналу: можно посмотреть количество положительных клеток по конкретному каналу, например FITC и ДАПИ, если это необходимо. И если у пользователя есть некий набор для определения жизнеспособности по определенному флуоресцентному каналу, он может использовать этот счетчик тоже.

Есть в этом приборе и калькулятор разведения: пользователь может ввести какие-то данные, чтобы облегчить свою работу.
Кроме того, в устройстве есть возможность отсечения лишних клеток: например, если пользователь работает с клетками, диаметр которых находится в определенном диапазоне, он может установить гид и работать только в этом диапазоне. «Мусор» – частицы, которые меньше или больше по размеру — не будут учитываться, таким образом исследователь сможет подтянуть результаты к реальным своим значениям.
Если говорить об оригинале, Countess 3 FL по-прежнему доступен в Москве. На момент прочтения доклада порядка 8 систем с флуоресцентными кубами были доступны на складе.
В отличие от предыдущих моделей, Countess 3 может работать и с многоразовыми слайдами, а китайская система работает только с одноразовыми. Эта же система может работать и с одноразовыми, и с многоразовыми, причем одноразовые слайды взаимозаменяемы — и для Countess 3, и для C100, так что пользователи, у которых есть Countess, могут без сомнения брать китайские слайды от RWD и работать: эти комплектующие абсолютно идентичны, как и собственно приборы. Небольшая разница есть только в интерфейсе и его визуальной части, в то время как по скорости анализа приборы сопоставимы, по диапазону измерений — тоже. Оба имеют сенсорный экран, автофокус, подсчет в светлом поле, анализ флуоресцентных клеток.
В области микроскопии китайцы предлагают довольно хороший выбор так называемых реплик. Если посмотреть на то, что предлагает Biobase — это клон микроскопа Olympus либо Zeiss: их станины абсолютно идентичны.
Если говорить о цене — они, конечно, существенно дешевле: в этих приборах немного проще оптика, но для рутинных исследовательских задач они себя вполне оправдывают.
По китайским конфокальным микроскопам пока у «Диаэм» нет достоверной информации — за исключением того, что они существуют, но об их преимуществах и недостатках пока специалисты судить не берутся.
Но для рутинной микроскопии либо иммуногистохимии, а также рутинной микроскопии мазков либо микроскопии клеточных культур, в том числе с использованием флуоресцентных красителей, решения есть. Они дешевле, чем Olympus или Nikon.
Что касается классики жанра – Olympus по-прежнему доступен.
При существенно более высокой цене несомненный плюс Olympus`а в том, что у него есть регистрационное удостоверение Минздрава, и если организация пользователя «привязана» к этому министерству и потому ей необходимо регистрационное удостоверение, то такая техника по-прежнему доступна.
Эта система хороша всем, в первую очередь своей модульностью: из нее можно собрать все, что угодно. Пользователь может купить инвертированный микроскоп и со временем произвести его апгрейд до конфокальной системы. Конфокальные микроскопы Olympus тоже в целом доступны, хотя с их поставками дело обстоит сложнее.

Тайваньская компания Blue-Ray Biotech в настоящее время поставляет для «Диаэм» замечательные цифровые микроскопы EzScope 101, которые относительно недороги и хорошо себя зарекомендовали в проведении рутинных исследований в области микроскопии клеточных культур.
Это система довольно компактная; ее можно посмотреть на стенде «Диаэм»: вот эта маленькая коробочка и есть микроскоп.
Он обладает моторизованной фокусировкой, 1.3-мегапиксельной камерой с CMOS матрицей, допускает частоту изображений до 8 кадров в секунду в режиме реального времени.
Единственный нюанс: изображение здесь выводится только на компьютер и потому в лаборатории должен быть компьютер для подключения. Экспорт изображения возможен в .tiff формате; если необходимо записывать видео, это можно сделать в формате .avi.

Из плюсов этой системы: ее можно ставить внутрь СО2 инкубатора, она не боится высокой влажности, и пользователь может наблюдать за ростом клеток в режиме онлайн, не вытаскивая образец постоянно туда-сюда.
Опционально можно установить препаратоводитель, что сделает работу с прибором еще удобнее. Кроме того, можно дополнить прибор объективом х20, если нужно проводить некие детализированные исследования.
Система оснащена функцией фазово-контрастной микроскопии; других методов контрастирования здесь не предусмотрено.
Подводя итог, можно сказать: EzScope 101 — это «рабочая лошадка» для клеточной лаборатории.
Если говорить о классической аппаратуре, то у «Диаэм» осталась система Evos M5000: она доступна на складе, закуплена в текущем году (на момент прочтения доклада), поэтому есть возможность предложить покупателям такого хорошего многофункционального «помощника» для лаборатории.
Из плюсов системы можно назвать до трех каналов флуоресцентной детекции. Кроме того, здесь есть возможность автоматической фокусировки, функция Z-stack для работы со сложными объектами (например, какими-нибудь сфероидами). Система может работать в режиме таймлапса для изучения процесса в динамике, когда пользователь задает максимальные интервал и частоту съемки и запускает регистрацию изображения.
Компания RWD предлагает специализированную систему RFLSI III, которая позволяет визуализировать кровоснабжение в органах. Это будет интересно исследователям, работающим в области изучения, например, послеинсультных состояний, восстановления органов после инсультов, после каких-то ишемий, в области изучения влияния препаратов на кровоснабжение — все это подразумевает работу с модельными организмами. То есть это не диагностическое оборудование, это система для работы с модельными животными.
Работа в ней может проводиться в режиме реального времени: пользователь может посмотреть перфузию головного мозга, исследовать ишемию конечностей и органов, изучать васкулизации тканей после ожоговых состояний, а также после трансплантации кожного лоскута посмотреть, как интенсивно он прорастает, как влияет препарат на васкулизацию некоего поврежденного либо репарированного участка.
Также эта система пригодится для изучения микроциркуляции в конечностях после каких-то пересадок: например, если на модельном организме провели пересадку и нужно посмотреть как действует иммуносупрессивный препарат, который позволяет увеличить приживаемость и снизить отторжение органа – можете посмотреть насколько интенсивно происходит приживление в его присутствии. В презентации приведены ссылки на статьи: их много, автор доклада выразил готовность передать по запросу полную информацию об этих ссылках и работах.
Примеры применения системы
Использование технологии LSCI для наблюдения и количественного анализа изменения кровотока головного мозга: вводили мыши определенный препарат и смотрели в режиме реального времени, как изменяется васкулизация. Для этого мышь была трепанирована: у нее сняли верхнюю часть черепной коробки, вскрыли, имплантировали окошко и наблюдали через него такую картину.
Еще одно интересное применение прибора продемонстрировано Ассоциацией диабетологов США: технологию использовали для определения изменения регионального кровотока и распределения крови в кровеносных сосудах мыши для оценки терапевтического эффекта низкомолекулярных веществ при диабете.
Насколько известно докладчику, исследовалось влияние взаимодействие низкомолекулярных веществ, которые имеют сродство к инсулиновым рецепторам, с этими рецепторами — и влияние на изменение кровотока.
Тоже интересная публикация: причем система не только визуализирует, но еще и показывает количественно показывает эти изменения в динамике.
Когда мы говорим о клеточном анализе, это обычно ассоциируется с красивыми флуоресцентными картинками. Но при этом нередко забывают, что клеточный анализ — это не только картинки, его можно проводить и в планшетном формате.
«Диаэм» представляет планшетный ридер от Biobase – это фотометр BK-EL 10C, который может существенно облегчить работу в лаборатории в плане проведения МТТ теста (для него нужен дополнительный фильтр). Прибор относительно недорогой, его можно посмотреть на стенде: он работает в формате 96-луночного планшета. Это не спектрофотометр — только фотометр, он работает на фиксированных длинах волн.
Среди предлагаемого оборудования есть и спектрофотометр от китайской компании Allsheng: FlexA-200 / FlexA-200HT.
Здесь уже используется встроенный монохроматор.
У всех описанных вариантов есть и встроенные термошейкеры.
В таких системах можно провести спектральные исследования не только по МТТ тесту, но и более расширенные.
Если говорить о работе с флуоресцентными метками, то китайская компания Allsheng выпустила довольно неплохой аналог прибора Varioskan Lux от Thermo FS. Это довольно неплохое универсальное решение на все случаи жизни: прибор работает и в режиме абсорбции, и измерения флуоресценции, с его помощью можно измерить люминесценцию, задействовать метод time-resolved photoluminescence (TRPL), а некоторые модели Allsheng могут даже работать в направлении изучения поляризации флуоресценции — список исследовательских направлений довольно велик.
Концепция прибора в целом «списана» с Varioskan Lux, тем не менее прибор хорошо себя зарекомендовал; он совместим с планшетами от 6 до 384 лунок: можно поставить в него культуральный планшет, посмотреть флуоресценцию, хемилюминесценцию и т. д.
При необходимости в него можно установить до двух инжекторов, которые будут в определенный период времени добавлять нужный компонент в определенную лунку планшета, чтобы запустить некий процесс или ввести в систему то, что может повлиять на динамику сигнала.

Если взглянуть на слайд, на котором сравниваются несколько моделей компании планшетных ридеров от Allsheng от Feyond 200 до Feyond 500, можно увидеть, что от модели к модели в этих приборах присутствует различный набор опций. Все это влияет на цену. Если перед исследователем стоит задача, связанная чисто с изучением оптической плотности, можно выбрать самый простой Feyond 200, а если пользователю нужен некий универсальный прибор на все случаи жизни, следует отдать предпочтение модели Feyond А500 – с ее помощью можно измерить все.
Мы не раз отмечали, что получению красивых иллюстраций для публикаций предшествует очень тяжелая кропотливая работа, для выполнения которой «Диаэм» готов предложить ряд решений — в первую очередь для приготовления суспензий клеток (если проводится работа с органами или фрагментами ткани и нужно получить суспензию), а также для сепарации, культивирования клеток (это СО2 -инкубаторы) и криоконсервации – заморозки культур клеток в суспензии.
Если говорить о диссоциации, то самое простое – это взять ступку, пестик, долить немного протеолитического фермента и перетереть полученную смесь, но это неприемлемо, когда стоит задача стандартизировать процедуру и повысить выживаемость клеток. В таком случае можно воспользоваться клеточным диссоциатором DSC-400 от компании RWD, представленным у нас на стенде.
В приборе комбинируется деликатное механическое и ферментативное воздействие, что в сочетании с подогревом образцов дает высокую выживаемость клеток.
Его преимущество в том, что прибор может работать одновременно с четырьмя пробирками, при этом можно независимо задавать для каждой пробирки скорость вращения перетирающего элемента, температуру, интенсивность вращения, можно создавать свой протокол или использовать протокол производителя для того, чтобы обеспечить максимальную воспроизводимость. А стерильные пробирки обеспечивают надлежащую чистоту и защиту образцов от микоплазм и бактерий. Можно сказать, что это «история» о стандартизации, повышении выживаемости клеток и освобождении от рутины.
Магнитная сепарация MACS — это довольно неплохая, хотя и не мегаэффективная и ультрапроизводительная, но тем не менее довольно доступная для рядового пользователя замена FACS сортировке.
Суть MACS-сортировки в том, что для сортировки и для отбора нужной популяции клеток используются меченые антитела – они конъюгированы с магнитным носителем. Протокол довольно прост. На первой стадии он включает инкубацию клеток с антителами, которые входят в состав наборов. Цены на такие наборы приведены: это в основном позволяет выделить CD3+, CD4+ и CD8+ клетки.
После добавления антител с магнитным носителем, прогонки и элюции на выходе пользователь получает популяцию клеток нужного фенотипа.
Если оценить стоимость магнитного сепаратора и клеточного сортера, будет понятно, что уровни этих цен несопоставимы.
Для инкубации «Диаэм» может предложить в качестве удачных аналогов CO2-инкубатор от RWD. У этого производителя представлена только 175-литровая модель, но этот объем, вероятно, и можно считать самым ходовым.
Диапазон у него стандартный – поддерживает от 0 до 20% содержания СО2. При этом производитель предусмотрел возможность высокотемпературной стерилизации внутреннего пространства камеры для обеспечения безопасности клеток, с которыми ведется работа. Таким образом, после проведения инкубации пользователь включает режим стерилизации и получает «прожаренный» инкубатор для дальнейшей работы.
Впрочем, СО2-инкубаторы Binder по-прежнему доступны. Их качество не вызывает сомнений, но цена существенно выше: сказывается европейская сборка. В этих приборах предусмотрена высокотемпературная стерилизация при 180°С. К сожалению, в связи с последними событиями сроки поставки этого оборудования сильно увеличились. Однако если речь не идет о срочном заказе, такой инкубатор по-прежнему можно привезти.
Поскольку программируемые замораживатели от европейских и американских производителей ушли с российского рынка, «Диаэм» спасла компания Haier Biomedical, ведь Haier – это не только кондиционеры и холодильники, но и довольно неплохие низкотемпературные морозильники, криохранилища и программируемые замораживатели (например, CJ-l37), один из которых представлен на стенде.
Помимо программируемых замораживателей, преимущество которых заключается в возможности замораживать и мешки с культурами клеток, и пробирки, и довольно большие объемы, есть довольно бюджетное и эффективное решение от компании Nest – штативы для замораживания (номера по каталогу 200102, 200101), они тоже есть на стенде. Такой штатив позволяет заморозить клетки, просто расставив пробирки с обработанными криопротектантом типа ДМСО культурами клеток внутри такого штатива и убрав в морозильник на -80°С. За счет этой специальной вставки и расположения пробирок скорость снижения температуры в пробирке будет зафиксирована, что предотвращает образование кристаллического льда, повреждающего клетки. После заморозки пользователь достает пробирки и помещает их в сосуды Дьюара, криохранилища и так далее.
Тот же Haier Biomedical предлагает различные варианты криохранилищ.
Есть большие системы (например, YDD-1000) для больших масштабов — когда речь о большом количестве продуцентов, большом централизованном банке материалов и нужна максимальная сохранность, то подходят такие решения — от 13 тысяч до 94-95 тысяч криопробирок в формате до 2 мл. Такая система предполагает хранение в двух форматах – в жидком азоте или в парах азота при наличии особых требований по предотвращению кроссконтаминации. В этом случае хранилище заполняется жидким азотом не на весь объем, а только снизу, пары заполняют все пространство и обеспечивают охлаждение и отвод тепла. Система имеет жидкокристаллический дисплей, на который выводятся все данные о температуре внутри этого хранилища, уровне азота и т. д. с возможностью подключения внешней системы оповещения сотрудников лаборатории об аварийных ситуациях в случае необходимости.
Если нет необходимости хранить огромное количество образцов, пригодятся криохранилища поменьше — серии Smart.
Фактически это аналоги известных систем от Thermo FS под названием Locator и Locator Plus. По объему они очень близки, но гораздо дешевле, чем их «предшественники»-оригиналы. Особенности этих систем во вместимости до 6 тысяч криопробирок, прочной алюминиевой раме, наличии встроенного жидкокристаллического дисплея для индикации температуры внутри сосуда и термодатчика для мониторинга текущей температуры. Есть также замочек для механической блокировки крышки. В целом получается хорошая замена моделям Locator 4 – Locator 6.
Также у Haier Biomedical есть драйшипперы для перевозки образцов (например, YDH-10-125). Особенности драйшиппера в том, что азот не просто плещется внутри резервуара, а впитывается. Внутри канистры размещена специальная пористая материя, впитывающая азот. Поэтому, если при перевозке сосуд упадет на бок, из него ничего не вытекает. Охлаждение же происходит за счет испарения азота, впитанного в эту пористую поверхность.
Такое устройство подходит для перевозки биоматериалов как в криосоломинах (образцы спермы, яйцеклетки), так и в классических криопробирках по 2, 5, 7 мл. Такие сосуды Дьюара разных объемов тоже есть на складе.
В заключение хотелось бы отметить, что «Диаэм» не стремится просто заменить все европейское: напротив, компания пытается сохранить тех поставщиков которые с ней уже работают, и подтверждением тому служит внушительный список компаний из разных сторон, которые по-прежнему поставляют свою продукцию: среди них Dolomite из Великобритании, Vilber из Франции и другие.
«Диаэм» стремится сохранить бережное отношение к действующим партнерам, готовым поставлять свою продукцию и поддерживать компанию в рамках такого сотрудничества. При этом список таких партнеров постоянно пополняется новыми поставщиками, информацией о которых сотрудники с удовольствием делятся.
В конце года обращаем внимание на актуальность информации о товарах, которые есть на складе компании: что-то из ассортимента уже не поставляется, но есть в виде складских остатков. Сайт «Диаэм» организован так, чтобы пользователь мог отсортировать товары по наличию, просто нажав на соответствующую кнопку.
Призывая обратить внимание на обновленный интерфейс сайта «Диаэм», его сотрудники напоминают о том, что идет доработка раздела «Химические реактивы, препараты, наборы», где появились тематические рубрикаторы по культуральным средам, антителам и пр. Зайдя в этот раздел, пользователь может оперативно получить информацию по этим продуктам, и зарегистрированный пользователь может за несколько кликов получить коммерческое предложение по интересующим его товарам.
Помогают разобраться в широком ассортименте регулярные вебинары, приглашения на которые рассылаются подписчикам. Их тематика различна: клеточная биология, генетика, химия, так что рекомендуется стать подписчиком для того, чтобы получать такую интересную информацию. Даже если пользователь не смог принять участие, впоследствии «Диаэм» оставляет на сайте материалы состоявшихся вебинаров, в том числе онлайн презентации и пр., и предоставляет возможность самостоятельной загрузки с сайта только тех материалов, которые интересны конкретному клиенту в соответствии с его специализацией.
Дополнительные вопросы по продукции, поставляемой компанией, можно задать по телефону 8-985-929-67-28 или электронной почте sir@dia-m.ru.
Новость о мультиконференции «Life Sciences, биотехнологии и аналитическая химия в современных условиях. Взгляд на Восток?»
С помощью личного кабинета Вы сможете:
Сравнение